對于
ATCC細胞的初代培養或原代培養,是從供體獲取組織后的第1次培養。其主要的優點是組織和細胞剛剛離體,生物性狀尚未發生很大的變化,具有二倍體遺傳性狀,在供體來源充分、生物條件穩定的情況下(年齡、性別),在一定程度上能反映體內狀態。
ATCC細胞進行初代培養的實驗步驟如下:
1.剪切
把組織小塊(1cm³)置入小燒杯或青霉素小瓶中,用Hanks液漂液二三次以去掉表面血污,吸凈Hanks液,用眼科剪反復剪切成1mm³塊為止。
2.擺布
用彎頭吸管吸取若干小塊,置入培養瓶中;用吸管彎頭把組織小塊擺布在培養瓶底上,小塊相互距離以0.5cm為宜,每一25ml培養瓶底可擺布20-30塊。
3.輕輕翻轉培養瓶,令瓶底向上。注意翻瓶時勿令組織小塊流動,塞好瓶塞,置36.5℃溫箱2小時左右(勿超過4小時),使小塊微干涸。
4.培養
取出培養瓶并開塞,保持46°斜持培養瓶(瓶底仍向上),向瓶底角部輕輕注入培養液小許,然后緩緩再把培養瓶翻轉過來,讓培養液慢慢覆蓋附于瓶底上的ATCC細胞組織小塊(組織小塊附著尚不牢,注意不要把組織塊沖走);置溫箱中靜止培養。待細胞從組織塊游出數量增多后,再補加培養液。